外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/10/06 07:56:30

这属于蓝白斑筛选挑白斑
　野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝.编辑本段适用方面
　　设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株.这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变,造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽（即α肽链）,从而不具有生物活性,即无法作用于X-gal产生蓝色物质.用于蓝白斑筛选的载体具有一段称为lacz'的基因,lacz'中包括：一段β-半乳糖苷酶的启动子；编码α肽链的区段；一个多克隆位点(MCS).MCS位于编码α肽链的区段中,是外源DNA的选择性插入位点,但其本身不影响载体编码α肽链的功能活性.虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶,但当菌体中含有带lacz'的质粒后,质粒lacz'基因编码的α肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的β-半乳糖苷酶突变体互补,具有与完整β-半乳糖苷酶相同的作用X-gal生成蓝色物质的能力,这种现象即α-互补.　　操作中,添加IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)以激活lacz'中的β-半乳糖苷酶的启动子,在含有X-gal的固体平板培养基中菌落呈现蓝色.以上是携带空载体的菌株产生的表型.当外源DNA（即目的片段）与含lacz'的载体连接时,会插入进MCS,使α肽链读码框破坏,这种重组质粒不再表达α肽链,将它导入宿主缺陷菌株则无α互补作用,不产生活性β-半乳糖苷酶,即不可分解培养基中的X-gal产生蓝色,培养表型即呈现白色菌落.　　实验中,通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的.含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素,这样,一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性,不生长；转化了空载体,即未重组质粒的菌,长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌,即目的重组菌,长成白色菌落.

外源基因与pUC18载体连接后,导入大肠杆菌细胞中,在选择性培养基中应该是挑取白斑还是蓝班? 外源基因插入puc18载体中导入大肠杆菌受体细胞筛选白斑还是蓝斑我国科学家在利用基因工程培育抗虫棉的过程中,经提取目的基因、目的基因与载体结合、将目的基因导入受体细胞这三个步骤后,在全有人找公司合成过目的基因吗?拿到克隆了目的基因的载体后,能否直接导入大肠杆菌中直接扩增? 目的基因导入受体细胞是怎样进行的?如何防止目的基因与质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接?请 PCR获得基因转入连接病毒载体到最后重组载体导入细胞全过程. 目的基因导入细胞后是怎么发展会怎么样目的基因在细胞中会怎么样如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关基因工程中表达载体构建好后,可以直接导入受体细胞吗?还是先导入微生物细胞,然后让微生物感染受体细胞? 基因治疗是将健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞中吗? 1在植物组织培养中,要对培养基进行什么处理 2为了准确检测细胞中是否导入了目的基因,可采用什么做探针与基因组DNA杂交在DNA测序前,将目的基因转化入大肠杆菌后,用来培养大肠杆菌的固体培养基中加入的药品是什么及作用?