如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/10/03 05:13:53

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关键点.

已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制备（常见的有氯化钙法）→转化（将重组载体导入感受态细胞中）→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板,倒置培养18-20个小时→筛选和快速鉴定（直接挑取单克隆菌落,进行菌落PCR,电泳检测PCR产物,挑取阳性克隆的菌落）

如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化? 菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,预测重组子的目的基因PCR电泳图目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,请预测重组子的目的基因PCR电泳目的基因片段与载体DNA连接的主要有? 双基因载体连接需要将两个不同的基因同时连接到一个载体上,一般而言,是先将其中一个基因和载体相连,再将另一个载体和其相如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定. 载体中有启动子和终止子,如何将目的基因中的启动子和终止子去掉?并连接到载体中