质粒转染细胞不表达的问题~
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/13 18:05:29
质粒转染细胞不表达的问题~
想研究某跨膜蛋白,构建真核表达质粒(构建了多种,载体有PCDNA3.1-FLAG,PCDNA3,1-V5,PCMV-5'端MYC,PCDNA3-5'FLAG,PCDNA3-5'HA),转染始终不表达,细胞换过293T,AD293,COS1,COS7等,转染操作的人也换了好几个,始终检测不到目的条带~质粒酶切鉴定和测序都正确,不存在移码和无义突变,启动子序列也正确,起始密码子和终止密码子的问题也考虑了,实在想不出有别的什么问题了,希望有人能帮我分析一下,
想研究某跨膜蛋白,构建真核表达质粒(构建了多种,载体有PCDNA3.1-FLAG,PCDNA3,1-V5,PCMV-5'端MYC,PCDNA3-5'FLAG,PCDNA3-5'HA),转染始终不表达,细胞换过293T,AD293,COS1,COS7等,转染操作的人也换了好几个,始终检测不到目的条带~质粒酶切鉴定和测序都正确,不存在移码和无义突变,启动子序列也正确,起始密码子和终止密码子的问题也考虑了,实在想不出有别的什么问题了,希望有人能帮我分析一下,
不知道你没杂出条带是因为什么原因,还有你杂交的抗体是目的蛋白的抗体吗?你杂杂标签蛋白试试,看看有没有条带啊?我这么说是因为,膜蛋白确实不好提取,而且提取后可能空间构想改变了,你的抗体可能识别不了了,而标签蛋白是多肽,构象不会受影响,只要不被你的目的蛋白档上就行,所以你可以用标签蛋白的抗体杂交下,试试.一般最好把标签和目的蛋白融合表达一下
质粒转染细胞不表达的问题~
哪里细胞的质粒转染做得好?
质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗?
细胞过表达中质粒如何构建及转染?
真核表达分泌型蛋白,有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定,那么转染之后上清和细胞怎样收样?
哪一家公司细胞的质粒转染做得好?
转染的cas9质粒在细胞中能复制吗
质粒转染肺癌细胞,转染效率一般能有多少?
PF用带目标基因的质粒(pEGFP-N1)转染HepG2细胞,用G418筛选稳定表达株10天,GFP表达减弱减少.
做质粒转染293T细胞,提取质粒后用单酶切嘛?为啥
请问HEK293细胞如何将质粒转染进去,有没有具体的步骤?我有lipo2000
进行质粒的细胞转染实验,摸索条件包括哪些呢?比如 温度.