作业帮分子量120kDa,转膜条件求助
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/07/17 07:25:10
分子量120kDa,转膜条件求助
最近一个月,蛋白一直做不顺,蛋白分子量120KD,转膜时间2H~
半干转：切NC膜4.5cm*1.5cm,转膜电流7mA,2h~转完染膜染胶,上面什么都没有
湿转：NC膜 转膜电流250mA,2h~转完染膜染胶都有蛋白,还要再延长时间么……加到250mA~300mA,还是没做出来；PVDF膜,300mA 2h,试了两次,之前用甲醇泡过15-20min激活的,膜有点花,转完膜染胶还是有残留,染膜没怎么看到蛋白,也有注意用冰袋降温了……marker转膜完能看到,脱脂牛奶封闭2h以后膜的颜色不花了,但是marker看不清楚了……
之后一抗santa 1:200 4℃过夜,二扛ICL 1:5000
β-actin用半干转一直都很好,总感觉目的条带不出来可能问题在转膜上,
1、我的转膜条件是不是有问题,如果是,需要怎么调整?
2、湿转液配的时候,120KD需要加SDS么?
最近一个月,蛋白一直做不顺,蛋白分子量120KD,转膜时间2H~
半干转：切NC膜4.5cm*1.5cm,转膜电流7mA,2h~转完染膜染胶,上面什么都没有
湿转：NC膜 转膜电流250mA,2h~转完染膜染胶都有蛋白,还要再延长时间么……加到250mA~300mA,还是没做出来；PVDF膜,300mA 2h,试了两次,之前用甲醇泡过15-20min激活的,膜有点花,转完膜染胶还是有残留,染膜没怎么看到蛋白,也有注意用冰袋降温了……marker转膜完能看到,脱脂牛奶封闭2h以后膜的颜色不花了,但是marker看不清楚了……
之后一抗santa 1:200 4℃过夜,二扛ICL 1:5000
β-actin用半干转一直都很好,总感觉目的条带不出来可能问题在转膜上,
1、我的转膜条件是不是有问题,如果是,需要怎么调整?
2、湿转液配的时候,120KD需要加SDS么?
我在网上搜了一下,蛋白质从凝胶转印至膜
1 ）半干电转移法
1． 用蒸馏水淋洗半干装置的平板电极.…
具体的你看看这个.
1 ）半干电转移法
1． 用蒸馏水淋洗半干装置的平板电极.…
具体的你看看这个.