双向电泳中,TCA丙酮法提蛋白的注意事项
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/10/01 19:44:57
双向电泳中,TCA丙酮法提蛋白的注意事项
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我以前提的蛋白用的是TCA-丙酮法,可是跑了好几次,电压都升不上去,谷友们说可能是盐离子浓度过高,但是我用超滤的方法试了,电压还是升不上去,我只有重提蛋白,(我还是想用TCA-丙酮法)但我不知大家在用TCA-丙酮法提取蛋白时,在作等电聚焦前是不是都有一个除盐过程呀.(如超滤,透析)
不知大家用这种方法提的怎样,效果如何?希望给一点建议我用的是丙酮沉淀法,8000,10000都能在设定的程序时间内达到.
有资料说丙酮沉淀丢失低丰度蛋白,但是我胶片上低丰度蛋白还是有一些点,我估计丙酮沉淀后蛋白损失在30%左右.
TCA丙酮沉淀后蛋白质可能很难重新溶解或完全不能重溶,还有长时间地将样本处于这种低PH值的溶液中能使一些蛋白降解或修饰.我用的效果 也不好,溶解不完全,建议你用2D-clean up Kit尝试.效果不错.请问2D-clean up Kit,从那能买到呀?价格大概是多少?2D-clean up Kit是国药总代理的,当地应该有经销商,你可以百度找到国药问你所在的地方的代理,价格好像是2000多.我搜索了一下本版的TCA/acetone沉淀方法,大家都反映说是这种沉淀方法蛋白损失较多,不知道大家说的蛋白损失是说在沉淀过程中由于沉淀不完全造成的损失还是由于难于溶解造成的损失呢?TCA/acetone沉淀法提取的蛋白会偏酸,建议溶解蛋白后调PH.我们用的还不错啊,电压可以上的去的啊
不知大家用这种方法提的怎样,效果如何?希望给一点建议我用的是丙酮沉淀法,8000,10000都能在设定的程序时间内达到.
有资料说丙酮沉淀丢失低丰度蛋白,但是我胶片上低丰度蛋白还是有一些点,我估计丙酮沉淀后蛋白损失在30%左右.
TCA丙酮沉淀后蛋白质可能很难重新溶解或完全不能重溶,还有长时间地将样本处于这种低PH值的溶液中能使一些蛋白降解或修饰.我用的效果 也不好,溶解不完全,建议你用2D-clean up Kit尝试.效果不错.请问2D-clean up Kit,从那能买到呀?价格大概是多少?2D-clean up Kit是国药总代理的,当地应该有经销商,你可以百度找到国药问你所在的地方的代理,价格好像是2000多.我搜索了一下本版的TCA/acetone沉淀方法,大家都反映说是这种沉淀方法蛋白损失较多,不知道大家说的蛋白损失是说在沉淀过程中由于沉淀不完全造成的损失还是由于难于溶解造成的损失呢?TCA/acetone沉淀法提取的蛋白会偏酸,建议溶解蛋白后调PH.我们用的还不错啊,电压可以上的去的啊
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