细胞冻存的操作步骤
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/10/03 01:08:32
细胞冻存的操作步骤
细胞冻存
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
这是我实验中用的protocol,
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
这是我实验中用的protocol,
细胞冻存的操作步骤
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我把需要冻存的细胞放 在-20度忘记拿到-80,放了10多天,还有活的希望吗?BxPC-3