做大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 巴氏杆菌的实验检测 一般都用什么方法 和仪器设备 请说的详细些

做大肠杆菌 沙门氏菌 葡萄球菌 巴氏杆菌的实验检测 一般都用什么方法 和仪器设备 请说的详细些

大肠埃希菌（Escherichia coli）
\x05取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）,直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中,培养18~24小时,必要时可延长至48小时.
取上述培养物0.2ml,接种至含5mlMUG培养基的试管内,培养,于5小时,24小时在366nm紫外线下观察,同时用未接种的MUG培养基作本底对照.若管内培养物呈现荧光,为MUG阳性；不呈现荧光,为MUG阴性.观察后,沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液,液面呈玫瑰红色,为靛基质阳性；呈试剂本色,为靛基质阴性.本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性.
如MUG阳性、靛基质阳性,判供试品检出大肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性,判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG阳性、靛基质阴性,或MUG阴性、靛基质阳性,则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上,培养18~24小时.
若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表1所列的菌落形态特征不符,判供试品未检出大肠埃希菌.若平板上生长的菌落与表1所列的菌落形态特征相符或疑似,应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的生化试验,确认是否为大肠埃希菌.
表1 大肠埃希菌菌落形态特征
培养基\x05菌落形态
曙红亚甲蓝琼脂\x05显蓝黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心,圆形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑,湿润,常有金属光泽
麦康凯琼脂\x05鲜桃红色或微红色,菌落中心呈深桃红色,圆形,扁平,边缘整齐,表面光滑,湿润
\x05沙门菌（Salmonella）
取供试品10g或10ml,直接或处理后接种至适量（不少于200ml）的营养肉汤培养基中,用匀浆仪或其他适宜方法混匀,培养18~24小时.
\x05 取上述培养物1ml,接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中,培养18~24小时后,分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上,培养18~24小时（必要时延长至40~48小时）.若平板上无菌落生长,或生长的菌落不同于表4所列特征,判供试品未检出沙门菌.
\x05 若平板上生长的菌落与表4所列的菌落形态特征相符或疑似,用接种针挑选2~3个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种,培养18~24小时,如斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层无黑色,判供试品未检出沙门菌.否则,应取三糖铁琼脂培养基斜面的培养物进行适宜的生化试验和血清凝集试验,确认是否为沙门菌.
表4 沙门菌菌落形态特征
培养基\x05菌落形态
胆盐硫乳琼脂\x05 无色至浅橙色,半透明,菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色
沙门、志贺菌属琼脂 无色至淡红色,半透明或不透明,菌落中心有时带黑褐色
曙红亚甲蓝琼脂\x05 无色至浅橙色,透明或半透明,光滑湿润的圆形菌落
麦康凯琼脂\x05 无色至浅橙色,透明或半透明,菌落中心有时为暗色.
\x05金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2),直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的亚硫酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基中,培养18~24小时,必要时可延长至48小时.取上述培养物,划线接种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上,培养24~72小时.若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表5所列特征,判供试品未检出金黄色葡萄球菌.
表5 金黄色葡萄球菌菌落形态特征
培养基\x05菌落形态
甘露醇氧化钠琼脂\x05金黄色,圆形凸起,边缘整齐,外围有黄色环,菌落直径0.1mm
卵黄氯化钠琼脂\x05金黄色,圆形凸起,边缘整齐,外围有卵磷脂分解的乳浊圈,菌落直径1~2mm
若平板上生长的菌落与表5所列的菌落特征相符或疑似,应挑选2~3个菌落,分别接种于营养琼脂培养基斜面上,培养18~24小时.取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色,并接种于营养肉汤培养基中,培养18~24小时,作为浆凝固酶试验.
血浆凝固酶试验 取灭菌小试管3支,各加入血浆和无菌水混合液（1：1）0.5ml,再分别加入可凝固株的营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml,即为试验管、阳性对照管和阴性对照管.将3管同时培养,3小时后开始观察直至24小时.阴性对照管的血浆应流动自如,阳性对照管血浆应凝固,若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性,否则为阴性.如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时,应另取制备血浆,重新试验.
若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性,判供试品未检出金黄色葡萄球菌.