作业帮做间接elisa时,以不同的抗原浓度包被,od值基本无变化
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/11/06 03:36:29
做间接elisa时,以不同的抗原浓度包被,od值基本无变化
分别以1ug/ml,2,4,8,10,0包被,结果各浓度的od值无明显变化,未包被的孔随着抗体稀释度变大od值变小,也很奇怪,封闭液用过bsa和脱脂奶粉,结果都一样
分别以1ug/ml,2,4,8,10,0包被,结果各浓度的od值无明显变化,未包被的孔随着抗体稀释度变大od值变小,也很奇怪,封闭液用过bsa和脱脂奶粉,结果都一样
包被抗原浓度过大,抗原浓度可试着再往下稀释；如0ug/ml测出的OD值与其它浓度差不多,理论上说应该存在非特异反应
包被抗原浓度的选择：
可通过棋盘滴定法进行测定,但用单项滴定法更为简便,其方法是将抗原进行一系列稀释包被微量反应板,再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤,再加酶结合物进行反应,经孵育洗涤后,加底物溶液显色,终止反应后分别测定O.D值,选择O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度.一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0,而不选择小于1.0的抗原浓度.阴性参考血清O.D值要求
再问： 师兄曾经做过更高的稀释度，就是以1.25往下倍比稀释，稀释到1.25/34768，od值都一样大，0包被的od值也差不多大，而且随着抗体稀释度变大值变小，按说0包被的od值应该没变化才对呀
再答： 按照你的情况应该是封闭时间不够，导致抗体吸附固相载体上而造成假阳性，但一般情况下1％的BSA封闭2小时就差不多了。 可以试着做以下3种对照看看是不是封闭液的问题： 空白对照1：不加抗原，封闭后直接加一抗血清（样本），其它相同。 空白对照2：抗原包被，不加一抗血清（样本），其它相同。 空白对照3：不加抗原，封闭后也不加一抗血清（样本），加入酶标记抗体，其它相同
包被抗原浓度的选择：
可通过棋盘滴定法进行测定,但用单项滴定法更为简便,其方法是将抗原进行一系列稀释包被微量反应板,再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤,再加酶结合物进行反应,经孵育洗涤后,加底物溶液显色,终止反应后分别测定O.D值,选择O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为最适包被浓度.一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0,而不选择小于1.0的抗原浓度.阴性参考血清O.D值要求
再问： 师兄曾经做过更高的稀释度，就是以1.25往下倍比稀释，稀释到1.25/34768，od值都一样大，0包被的od值也差不多大，而且随着抗体稀释度变大值变小，按说0包被的od值应该没变化才对呀
再答： 按照你的情况应该是封闭时间不够，导致抗体吸附固相载体上而造成假阳性，但一般情况下1％的BSA封闭2小时就差不多了。 可以试着做以下3种对照看看是不是封闭液的问题： 空白对照1：不加抗原，封闭后直接加一抗血清（样本），其它相同。 空白对照2：抗原包被，不加一抗血清（样本），其它相同。 空白对照3：不加抗原，封闭后也不加一抗血清（样本），加入酶标记抗体，其它相同
做间接elisa时,以不同的抗原浓度包被,od值基本无变化
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