（2013•闵行区一模）基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，图1中①-③示一种筛选方法的过

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/08/29 07:47:23

（2013•闵行区一模）基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，图1中①-③示一种筛选方法的过程．pBR322质粒含有两个抗性基因，分别是Amp（氨苄青霉素）抗性基因和Tet（四环素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位点（插入将导致Tet抗性基因功能性失活），请回答：

（1）图1中①过程所需的酶是______．
（2）经过①过程，ρBR322质粒可能出现的两种结果A是______．
（3）②过程表示用含四环素（使细胞停止生长，但不致死）和环丝氨酸（使生长的细胞致死）的培养基中培养细菌甲，则培养结果C表示培养基中可以存活的细菌包括______．
（4）若要进一步筛选出符合要求的受体细胞D，则③过程需要做的处理是（请参照过程②的方法）______．
（5）基因工程中使用的Ⅱ型限制性核酸内切酶通常可以识别长度为4-8个核苷酸的特异序列．下面示限制酶Sau3AⅠ对DNA片段切割的结果．

请分析，Sau3AⅠ的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是______．
（6）下表列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点，图2（含两个抗性基因的质粒）和图3（含目的基因的外源DNA）中箭头表示相关限制酶的酶切位点．

限制酶	XhoⅠ	BclⅠ	SalⅠ	BamHⅠ	XbaⅠ
识别序列及酶切位点	C↓TCGAG	T↓GATCA	G↓TCGAC	G↓GATCC	T↓CTAGA

据图2和图3分析，为了使目的基因和质粒实现定向连接和便于受体细胞的筛选，切割质粒的限制酶应选用______，切割含目的基因的外源DNA的酶应选用______．

（1）①过程为构建基因表达载体，需要对质粒进行切割和与目的基因相连接，所以要用限制酶和DNA连接酶；
（2）①为构建基因表达载体，会出现将目的基因与质粒成功重组和重组失败的结果，所以ρBR322会出现两种结果，重组质粒和未重组的质粒；
（3）细菌有三类：含有质粒（不是重组的）、含有重组质粒的、不含有质粒的．Tet抗性基因上有目的基因的插入位点，所以重组质粒上没有Tet抗性基因，成功导入重组质粒的细菌和没有导入的细菌均不含Tet抗性基因，即都不抗四环素，细胞可以在含四环素培养基上存活但不生长，而环丝氨酸会使生长的细胞致死，对不生长的细胞无影响，但会使含有抗四环素的细菌致死，所以C中成活的细菌有导入不成功的细菌和导入重组质粒的细菌．
（4）经过C后，现需要含重组质粒的细菌，含重组质粒的细菌含有Amp抗性基因，可在氨卡青霉素培养基中生长，而导入不成功的细菌会在其中死亡，所以可将经过C存活的细菌转入含氨卡青霉素的培养基中培养．
（5）根据图中切割位点T和G及结果知所识别的序列应为

（6）用XbaⅠ和BclⅠ既不破坏目的基因又可将其完整切下，而获取目的基因和重组质粒所用限制酶应保持一致
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶；
（2）重组质粒和未重组质粒；
（3）含有重组质粒的细菌和导入不成功的细菌；
（4）将存活的细菌转入含氨卡青霉素的培养基中培养；
（5）

；
（6）XbaⅠ和BclⅠXbaⅠ和BclⅠ

（2013•闵行区一模）基因工程操作步骤中，需要从受体细胞群中筛选出已获得目的基因的细胞，图1中①-③示一种筛选方法的过 1、筛选含有目的基因的受体细胞 1 书上说标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因从而将含有目的基因的细胞筛选出来基因可以从一个个体移动到另一个个体的原因（就是基因工程中目的基因导入受体细胞）, 请问标志基因为什么能筛选目的基因已注入受体细胞的细胞,过程是怎样的的? 目的基因的表达请判断：在基因工程操作中,只要在受体细胞中检测到目的基因,就能表达基因工程中载体、目的基因、受体细胞有什么区别? 基因工程中转化至受体细胞的目的基因一定能够成功表达吗? 在基因工程中,目的基因是否一定要整合到受体细胞的DNA上?为什么? 具有标记基因的质粒如何筛选目的基因,如何鉴别目的金银是否进入细胞中基因可以从一个个体移动到另一个个体的原因（就是基因工程中目的基因导入受体细胞）,老师好... 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么?