测磷酸化的蛋白和做免疫共沉淀意义上的区别在哪?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：语文作业时间：2024/07/17 12:14:10

我如果分别去测ILK,AKT的磷酸化水平,就可以知道他们的激活程度了,还有必要做免疫共沉淀吗?免疫共沉淀的结果是提示ILK/AKT结合在一起的水平有多高,但是结合也就意味着磷酸化,似乎两者做出的结果提示的是同一种东西?如果是这样,那我就没必要去做CO-IP了,后者肯定更烦更贵.
请大家赐教,这两天困扰我很久了这个问题我是这样想的,
测免疫共沉淀,目的是测这两种蛋白是否一个是激酶,另外一个是底物
也就是说这两个蛋白作用后才磷酸化
如果你只测磷酸化水平,有可能是其他蛋白激酶把他磷酸化了.
晕,不知道说的是否清楚,是否有道理多谢!经过几位老师的指点我发现我的问题有点不对,应该是单纯WB测磷酸化的蛋白与做免疫沉淀测磷酸化的蛋白之间的差别.对于你的第二个问题,我觉得差别不大.既然都是测磷酸化程度,那么WB显然比IP更简单,所以我会选择WB.据我观察,早期文献一般都会用WB测总蛋白,然后用IP测磷酸化程度；做IP时所用的抗体往往是针对某个磷酸化位点的抗体,而不是针对整个磷酸化分子的抗体,这大概是因为当时没有合适的抗体产品.现在如果你有针对某个磷酸化分子的抗体,那么做WB显然更简单.
但是无论是做IP还是WB,用的抗体都是磷酸化的抗体,应该说IP和WB用的抗体是一样的.如果只单纯WB去测总蛋白,而非磷酸化的那我想是没有意义的,信号转导关键就在蛋白磷酸化呀.

测磷酸化的蛋白和做免疫共沉淀意义上的区别在哪? 蛋白和RNA的共沉淀要做蛋白A和miRNA的免疫共沉淀,蛋白是上游,可是看到免疫共沉淀都是蛋白与蛋白之间的作用,这个做R pull-down assay和免疫共沉淀的区别求做染色质免疫共沉淀的原理和大致步骤免疫共沉淀若是测定三个蛋白的模块怎样做?需要三个的抗体吗? 磷酸化蛋白指的是什么?怎么知道自己做的蛋白是磷酸化蛋白? 已知两个蛋白有相互作用,用其中一个蛋白的抗体做免疫共沉淀,SDS-PAGE胶电泳后出现几条带? 在免疫共沉淀过程中的问题~加蛋白标签染色体免疫共沉淀中用的蛋白A/G琼脂糖可以自己做吗?该如何制作?难道只能买公司的? 免疫共沉淀与免疫沉淀区别用western blot做磷酸化蛋白的测定需要注意哪些问题染色体免疫共沉淀（CHIP）的实验步骤