作业帮荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的!
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/07/14 22:44:09
荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的!
是的啊!但是你要在一起上标注好哪个是标样以及重复,他就自动生成了
再问： 谢谢 请问具体怎样设置最后才会自动出现标准曲线啊？？？
再答： 每个机器不一样 我用的是biorad的，然后P上之前有一个面板显示96孔，你自己找找，一般在设置里面，然后选中所有做标样的孔，有一个选项，unknown，standard什么的，默认为unknown。然后你把它改成standard，选横方向(意思就是浓度梯度横向递增，竖排是重复)，就行了。 这个问题...前几天技术员来的时候我还专门问过呢，她的解释是绝对定量因为要求很高，所以当时给客户考虑的是每次实验都要做一次标准曲线（是每次PCR）。然后我问要是我觉得这次标准曲线ok，样品不好重跑一次能不能把上次protocol的标准曲线调出来直接设，她说所有的realtime的机器都没有这样的设置。就是说你每一次PCR都要跑一次标样！ 我个人觉得不用，只要每个样品有一个标准曲线就行了，剩下的把第一次的标准曲线调出来用就ok。 标准曲线是包括你的样和actin的啊，不知道你说的所有的样一个标准曲线怎么用？ 共用actin 的标准曲线？ 建议你的标样的模版DNA和actin都连在质粒上，从质粒扩标准曲线而不是回收产物，这样好一点
再问： 谢谢 请问具体怎样设置最后才会自动出现标准曲线啊？？？
再答： 每个机器不一样 我用的是biorad的，然后P上之前有一个面板显示96孔，你自己找找，一般在设置里面，然后选中所有做标样的孔，有一个选项，unknown，standard什么的，默认为unknown。然后你把它改成standard，选横方向(意思就是浓度梯度横向递增，竖排是重复)，就行了。 这个问题...前几天技术员来的时候我还专门问过呢，她的解释是绝对定量因为要求很高，所以当时给客户考虑的是每次实验都要做一次标准曲线（是每次PCR）。然后我问要是我觉得这次标准曲线ok，样品不好重跑一次能不能把上次protocol的标准曲线调出来直接设，她说所有的realtime的机器都没有这样的设置。就是说你每一次PCR都要跑一次标样！ 我个人觉得不用，只要每个样品有一个标准曲线就行了，剩下的把第一次的标准曲线调出来用就ok。 标准曲线是包括你的样和actin的啊，不知道你说的所有的样一个标准曲线怎么用？ 共用actin 的标准曲线？ 建议你的标样的模版DNA和actin都连在质粒上，从质粒扩标准曲线而不是回收产物，这样好一点
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