分离土壤中的细菌为什么要稀释

分离土壤中的细菌为什么要稀释

显微镜直接计数法和稀释平板计数法是测定微生物数量的常用方
法.
直接计数法中常用的是显微镜直接计数法,这种方法是先将待
测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数(图1-
3-1).根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微
生物总数.直接计数法所需设备简单,可迅速得到结果,而且在计数
的同时能观察到所研究微生物的形态特征,其缺点是难以计数微小的
细菌.这种方法一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数.
间接计数法最常用的是稀释平板计
数法,它是根据微生物的培养特征而设计
的计数方法.这种方法在样品中含菌数较
少的情形下,也可以完成计数.
应用稀释平板计数法计数时,需要
将待测样品配制成均匀的系列稀释液,尽
量使样品中的微生物细胞分散开.再取一
定稀释度、一定量的稀释液接种到平板
中,使其均匀分布于平板中的培养基内；
或是将一定量的稀释液,与溶化后冷却至
45℃左右的琼脂培养基混合,倾入无菌培
养皿中,摇匀、静置待凝.经过培养后,
就由单个微生物生长繁殖形成菌落,这样
的一个菌落就代表着一个微生物个体.统
计培养基中出现的菌落数,即可推算出检
测样品中的活菌数.
FOR EXAMPLE:]
土壤中好气性细菌的计数
土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的,这些数量众多的
微生物对提高土壤肥力有重要作用.因此,测定土壤中的含菌量可以
作为判定土壤肥力的一个重要指标.
材料器具
土壤样品；牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录二)、无菌水；培养皿、
移液管、天平、锥形瓶、试管、酒精灯、恒温培养箱、摇床等.
活动程序
1.制备土壤稀释液
取土壤表层5～10 cm 处的土样.准确称取1 g 土样,放入盛有
99 mL 无菌水的锥形瓶(250 mL,放有小玻璃珠)中,用手或摇床振荡
20 min,即制成102 倍的稀释液.
用1 mL无菌移液管,吸取10 2倍稀释液0.5 mL,移入装有4.5 mL
无菌水的试管中,配制成103 倍稀释液.
用同样的方法可制成稀释倍数为104、105、106 的系列稀释菌液
(图1-3-2).
图
移液时,要将移液管插入液面,吹吸3 次,每次吸上的液面要高
于前一次,让菌液混合均匀并减少稀释中的误差.每配一个稀释度要
换用一支移液管.
2.取样及倒平板
将无菌培养皿编号,依次为104、105、106,每一号码设置三个
重复.
用无菌移液管三支,分别吸取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释
液各0.2 mL,注入到相应编号的培养皿中(每个稀释倍数各三个培养皿).
将已灭菌牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化,待冷却至45～50 ℃左
右,倾入到无菌培养皿中,每皿约15 mL,轻轻转动培养皿,使土壤
稀释液与培养基混合均匀.
3.培养
将上述接种好的平板培养基冷却后,倒置放入28～30 ℃的恒温
培养箱中培养24～36 h,直至长出菌落为止.
4.观察记录
将实验中得到的菌落数填入表1-3-1.
结果分析
1.选取具有合适菌落数的稀释倍数并计数.
在计算结果时,从接种的3 个稀释度中选择一个合适稀释倍数,
统计出菌落数(图1-3-3).选择的原则是：
过
(1) 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～300 个菌落为
宜.霉菌以每个培养皿内有10～100 个菌落为宜.
(2) 同一稀释倍数各个重复的菌落数相差不太悬殊.
2.将统计出的菌落数按下列公式计算,得出每克样品菌数.
每克土壤样品菌数= 某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数