【急】酶联免疫吸附剂测定ELISA的相关问题

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/11/06 01:36:57

【急】酶联免疫吸附剂测定ELISA的相关问题
1 如何洗板?
文献说“手工洗板时每次加入洗涤液后,应静置15-30s,不要将一个酶标孔中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染.甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干.”
想问的是：“甩去洗涤液”中如何“甩去”?如果整块板一起甩不会导致交叉污染吗?
2 标本为动物脑匀浆,需要稀释吗?稀释多少倍合适呢?
2 我刚才问的不太对，想问动物脑固体做成匀浆时需要加多少倍的生理盐水。PS:说明书上说“细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释”，估计是能做脑匀浆。

1．我经常这么干没有遇到交叉污染的问题,就是整块板翻转,洗涤液倒入下水道以后,维持孔朝下底朝天的样子往下甩动板,跟瓶子里的最后一点水想倒出来的动作差不多．我一般觉得是往下甩,避免左右晃动比较好．不过你如果担心污染,不甩也没有关系,直接扣在吸水纸上吸干也是可以的,但是甩几下,省很多纸啊．重点是洗涤液倒干净之前不要把板翻回来正面．但是倒干净也不等于完全干掉,只要液体少到无法流淌就可以了,如果真干了的话,抗体抗原的结合可能失效．
倒掉样本时候最需要小心,之后的洗涤步骤其实不容易污染．
2．动物脑匀浆我没有做过．提醒你跟试剂生产商确定好是否能够测这种样本．我曾经遇到过ELISA试剂对含人血清的样本发生非特异性反应的倒霉情况,问了生产商才知他们根本没有测试过人血清.
如果生产商测试过动物脑匀浆的话,应该也能够告诉你恰当的稀释倍数.
第二个办法是从文献中找先例,沿用别人优化过的试验方案.
否则的话,你需要先做一个稀释试验,使用几个你确定为阳性的样本（不要第一次就用上你珍贵的实验样品）,稀释4X,10X,100X三个倍数应该够了（我做过的几个ELISA试剂对血清样本的建议倍数是4倍比较常见）,加上未稀释的你就有四个浓度梯度.关于稀释的注意事项你如果不清楚再问吧.
既然如此,你就更应该跟生产商要制作匀浆的实验方法啦,跟着他们的办法做最为保险.如果是国际大公司,两个工作日之内一定会有回复,有时候网站上就能找到这种信息.
我没有做过组织匀浆,但是对于加生理盐水这个说法感到很奇怪.我见过同事做皮肤组织匀浆是要用新鲜组织（或－80冷冻保存的组织）一边加液氮一边用杵臼捣碎,然后赶快加含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液,还要用注射针筒上下打散,最后离心取上清．

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