我最近在做microRNA的茎环RT-PCR,然后用PAGE电泳时,总是有很多非特异性的条带.请问大家在做这方面的时候也

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/07/14 03:51:54

我最近在做microRNA的茎环RT-PCR,然后用PAGE电泳时,总是有很多非特异性的条带.请问大家在做这方面的时候也遇到了吗?该怎么办呢?

miRNA由于太短,引物序列可优化范围很小,rt-pcr很容易有非特异性,很多引物都采用LNA来提高退火温度增加特异性.经环方法由于增加了一步特异性反转录理论上更提高了特异性,但结果可能仍不够理想.建议进一步提高退火温度试试,若不行只能继续优化引物甚至用LNA.若是公司设计的就打技术支持的电话吧
再问：非常感谢，我是采用的文献提供的引物都这样。

我最近在做microRNA的茎环RT-PCR,然后用PAGE电泳时,总是有很多非特异性的条带.请问大家在做这方面的时候也在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊? 请问,我反转录时设置了2个循环,cdna还可以做半定量PCR吗?Actin的pcr在500bp单一条带. 什么是PCR技术的非特异性扩增? 已知两个蛋白有相互作用,用其中一个蛋白的抗体做免疫共沉淀,SDS-PAGE胶电泳后出现几条带? 做microrna的pcr需要细胞数量最少多少我初学蛋白质电泳试验,对这张蛋白质电泳图不知怎样看,分析?请问图中MARKer的每条带的数值是多少?SDS PAGE蛋白最近在做实验RT-PCR, 请问哪位做过非还原PAGE蛋白质电泳检测其纯度（测分子量）?我用SDS－PAGE做过,有两条带.但过柱只有一个吸收峰,怀 PCR的电泳图,为什么老有这种情况,到底哪方面出了问题呢,我经常做PCR然后就是跑胶,时好时坏,自认为每次的操作都是一样用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致.