上游引物

同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深

合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程,在这个过程中会自动形成茎环结构,如果你的茎环结构设计合理的话.我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基,上面有说明的,是为了调整Tm值.上游引物不能全

引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-O

这是针对逆转录pcr而言,所谓的跨外显子就是一个引物（比如上游引物）、出现在两个外显子交界,那么做RT-PCR时,dna由于2个外显子被内含子隔开,引物就不会起作用了

在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列.在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,

用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说

你设计出来以后,BLAST一下,扩增是特异的,接着就像一般的real-timepcr一样做的行了,不需要上游引物高一点.引物的Tm值要求和你用的哪个公司的酶和你用的哪个仪器有关.

当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GCrich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GCrich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的

FPrimer:5'-TTGTAAAAAAATTAAATTAA-3'RPrimer:5'-CATATTTTAATTAATATTTC-3'你这个序列AT含量太高,尤其是5'端A有7个连续重复,引物本身很

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

如果该ATG是翻译起始位点,就没有蛋白翻译了.如果是inframe编码,就会少一个氨基酸再问：少了一个蛋氨酸，我的蛋白就是残缺肽了。。。那样子做相互作用会有影响吗？如果有结果了，实验数据可靠不？再答：

翻译不出来.首先在转录水平上能转录出全场mRNA其次但是到翻译水平是,核糖体会沿着mRNA从3‘端向5’端滑动,遇到第一个atg开始翻译,此后遇到终止子停止翻译.因此你的蛋白很难被翻译出来.但是,终止

随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.

是从NCBI里面的序列库中搜索的,自动搜索符合筛选条件的序列,从而给出引物序列blast是要求NCBI里面有的序列才能验证.你研究的物种基因组测序结果发布了吗?如果发布了的话就不用担心序列不全了

上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计

5':CGGAATTCACGCGCAAGATTAGGTGGGG3':CGGGATCCCCTTGGGAAGAAAAAGCAAG引物组成为：保护碱基+酶切位点+目的基因末端序列.由于你要扩增全部这段序列,

不能,扩增酶扩增一定长度后会脱落,但你引物的互补链没有扩增,无法呈指数扩增,30个循环后只是扩增30倍根本没产物

NCBI上面得到的是mRNA序列可以用oligodt反转录,也可以用与mRNA互补的特异引物来反转录再问：恩，特异性引物有一对，上游和下游，老师问我用上游还是下游，望回答具体点再答：反转录当然是下游了

克隆基因的编码框时,必须从ATG开始或UTR处开始.当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框；当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必

不用考虑.打分高即可.