作业帮做wb时条带不清楚原因
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/07/03 05:24:39
可能原因很多：1同源蛋白；2表位相似的杂带；3自身蛋白的修饰,糖基化,磷酸化等；4降解再问：那要怎么确认是什么原因造成的呢一共做了三次都出现这种情况再答：先看看旁边的带是多大。和你的同源蛋白大小类似吗
DTT不是上样的时候才加,可以在配制loadingbuffer的时候事先加好.你看看DTT的分子量,再算下该加多少克~
可能原因：蛋白上样量太少,蛋白转过去了,蛋白还没转到膜上去,丽春红灵敏度不够.你的蛋白是单一蛋白还是总蛋白?如果是总蛋白,而且上在同一道上,那就没必要做后面的了.很可能是转膜失败.
什么是不清楚?如果有拖带说明你电压太高了.100V跑吧如果是太淡看不清说明你点样的量不够或者PCR扩增出的浓度不高
上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime
出现两条带是非常正常的现象.抗体的原因：不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带；蛋白亚型表达的原因：我做了大概两年半的WB,经常会发现,一种蛋白
那就是PCR的问题了,建议用新的试剂再试下,最好先把反应液,酶,引物按比例先配好,再取混合液加引物
没有条带的原因很多：主要原因应该还是一抗的问题,整个流程试剂没有更换的话,就考虑一抗吧.WB的外包公司很多啊介绍一家鼎国昌盛,我在这个公司做过,服务蛮好的.
分离胶的浓度的问题.
解题思路：结合导数的几何意义易求得切线方程；利用导数求函数的单调性，进而求得极值。解题过程：
不排除是预染Marker质量又问题再问：marker没有问题，实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的，所以实验过程和仪器与他们不是很相同再答：那建议你在适当延长一下转膜的时间吧，三、四个小时
华纳兄弟电影公司的标志
1.protein-blot之前用Bradford测一下总蛋白量,估摸一下2.做完第一次后,用photoshop软件测一下各个内参条带的光密度值,这样可以给第二次调整的时候一个参考.
有很多影响因素：模板浓度,引物浓度,酶在反应过程中的不断消耗,循环数和温度等等.如果你已经P出来目的片段的话温度应该是适合的,可以加大模板和引物的量,建议回收片段后作为模板再P,这样得到的片段会较亮.
那要看你的目的基因具体的来源,大小级别的特性.TAE和别的缓冲液什么的,也有些影响,还有就是胶浓度,跑胶时候的电压控制什么的.
你给的条件非常模糊,无法判断.因为PCR的反应条件与很多参数有关系.如模板浓度,引物长度及GC含量,引物浓度,dNTPs浓度,选用的taqenzyme,缓冲液的离子含量,产物大小,变性时间,退火温度及
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,Tris8.86.8浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适.做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,电泳缓冲液的浓度
任何环节都有问题,我只能这么跟你说了
1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题