DNA电泳时,溴酚蓝条带距离加样孔1cm左右,而目的条带不见是怎么回事
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/24 02:45:39
溴酚蓝isvisibleduringtheelectrophoresissothatyouknowwhetherthemoleculesaremoving.Meanwhile,溴酚蓝hasappare
分子克隆上都是6X或10X的,你就按6X的配方换成11X的吧6x凝胶加样缓冲液0.25%(m/v)bromophenolblue0.25%(m/v)xylenexyanol40%(m/v)蔗糖水溶液或
会降解的吧不负责任建议:你把图片保存,然后全部回收,扔冰箱里明天再对应着看~~~~~或者你直接打电话给教授,网上用QQ之类的讨论也一样,反正都是电子图片
中间的是RNA
你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.
可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问:感谢回答,我会试试调节亮度。请问,这跟电泳时使用的染色液有关系吗
一般Marker中亮的条带是100ng,其他的条带是50ng.可以看到你回收之后的条带亮度估计在10ng~30ng左右,如果你的上样体积为10ul,则浓度应该是1ng~3ng/ul,这个浓度是很低的,
条带显示的亮度是你一定体积上样量的DNA总量,而你吸光度测定是浓度,两个比较不能说明什么,电泳只是体现有没有和相对其他条带DNA的大小和量
首先越靠近点样孔,分子量越大,如果你加了marker,可以根据厂家给的那张maker的图推测样品的大小,一般来说,在同一水平位置的分子量大致相同.没什么特别高深的技术含量分子量与亮度和长度无关的,亮度
可能有几个原因:一:上样缓冲液,用分子克隆上的配方做一次试试看(你所用的缓冲液是不是很久了?)二:如果你染色,脱色都没有问题,PAGE胶是不会说谎的三:不知道你是在哪种波长下所测得有数值?280nm是
非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物
核酸电泳时使用的是EB染料吗?如果提取的样品中还有较多的RNA,RNA分子量较小,电泳时跑在前面,会结合较多的EB,影响DNA的观察,建议RNA酶37度消化30分钟.再问:用的goldview。再答:
出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2
marker能看到吗?marker很清楚,电泳就没问题.说明没有DNA.可能提取失败,沉淀也许是盐.测测浓度吧,应该很低.看看提取程序是不是有问题.
RNA在提取过程中和保存期间非常容易被RNA酶降解,提取过程得非常小心,保存期间也得加RNA酶抑制剂,不知道紫外分光光度计检测时含量和纯度如何,及时被降解,也应该有拖尾才对,可能是浓度太低,建议加大上
开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只
如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况:1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.
如果不带颜色就需要,已经有颜色(无论什么颜色)就不需要
后加电泳液的话液体溢过胶体时的流动容易把蛋白质样本冲出其所在的井.而且这样做容易在胶体四周留下液体无法进入的空隙,可能影响电泳效果.应该是这样
能的.因为DGGE是部分变性,所以切胶回收后经过复性即可.根据你的酶切位点连接到载体上就可以送去测序了.不过有点奇怪为什么你想测序呢?