PCR扩增在100bp以下出现两条带-搜答案-智慧作业帮

你模板是什么?

正向引物：5'CTTCGAAATTC反向引物：5'CCGATCGGGAGA(TCTCCCGATCGG的反向互补序列）当然,这对引物有些短,其实真正设计时上下游引物的序列中都可包含部分基因1的序列,以平

你是说PCR产物电泳出现多带或产物没序后有多种序列?总之,有可能是引物退火温度太低,错配的结果.建议提高退火温度或换引物.

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

1.引物的质量是保证PCR特异性的关键,引物过长或过短均会使特异性降低,以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小

1、一百多BP也可以,不超过两百即可,150bp以内最好.2、坐标线?是标准曲线吧?你的方法是可以的.3、刚好100bp确实存在这个问题,一百几十BP就可以分开了.4、探针法在原理上更为严格,所得数据

楼主说的是扩增子,即两引物目标位点之间的序列长度.PCR过程中,扩增就跟修路一样,越长越费工.在能够保证特异性的情况下,当然是越短越有效率,100-200bp就是综合两方面的考虑而建议的最佳扩增子长度

第二次比如目的基因是300bps,母链DNA2000bpsforwardprimer从母链第25碱基开始由5'-3'开始复制,backwardprimer从第325由3'-5'开始反向复制.第一次复制

当然可以咯,不过我没明白为什么上游引物GCrich跟分两段扩增有什么关系,1.2K一次扩增是完全没有问题的,如果上游引物出现GCrich的情况,那么可以考虑在更加上游的地方设计引物啊,在这个基因外测的

这个,出现非特异性扩增估计跟模板,引物,以至于反应条件都有关系.可以减少延伸时间,因为你扩的片段很小,没有必要花很长时间延伸.我PSSR的程序是94度35s55度35s72度45s前面的预变性和最后的

这个你应该看仪器说明书啊,而且一般送货上门后有人会指导的啊.

可以,只要你的PCR扩增特异性够强,没有杂带.这其实就是理论和实际的差距,因为表达载体的扩增效率低,如果一次实验不成功,你还要从PCR步骤做起重新收集DNA,而如果克隆至扩增载体,每次只需扩增质粒回收

能说下原题么、

解题思路：PCR依据DNA复制的原理，要求熟悉DNA复制的过程及其特点。解题过程：解析：以模板DNA的两条链合成的子代DNA，只含有引物I或者引物II，其他的DNA同时含有引物I和引物II，所以含有引

非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物

首先试剂应该没有问题,现在连作为marker的基因都扩不好,那么一个是你的引物有问题,另一个就是反转录出问题了.遇到这样的问题应该一步一步的排除.首先确定反转录没有问题,一般的鉴定办法是扩增marke

用dl2000marker的话,在750bp（从上往下第三条带）和1000bp（第四条带）之间,

非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关.其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一

pcr技术扩增

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造

计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认