PCR电泳产物,观察到两个条带,一个为目的条带

在PCR的优化开始阶段,应用新的DNA模板,引物或热稳定DNA聚合酶等材料建立的PCR方法,其扩增效果一般总不是最佳的.这种PCR反应通常要求尽量抑制非特异性扩增和（或）增加目的DNA产物的产率.表1

蓝色条带分别是溴酚蓝和二甲苯青FF（请注意不是二甲苯氰）.溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同.希望能够对你有所帮助.

两者原因,可能是PCR体系没设计好,或者是胶没制好,跑电泳时注意保持电流恒定再问：多谢指教！跑电泳时我用的是恒功率，这个影响会很大吗？最近在做SSR标记有点迷茫！

你的电泳缓冲液和制胶缓冲液浓度不准或者脏了吧?换新的电泳缓冲液和制胶缓冲液试试.marker都出问题说明是你的胶的问题,或者电泳操作的问题.

可以照胶的时候去调节亮度,对比和γ射线,然后会清楚一些.同时,你优化下PCR扩增条件之类的,提高扩增效率.希望对你有帮助.望采纳.再问：感谢回答，我会试试调节亮度。请问，这跟电泳时使用的染色液有关系吗

1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看

为啥要把内参调一致呢你每次都也检测一下内参不就好了然后用目的基因的比上内参一般很少有什么调一致的吧.

PCR产物纯化试剂盒去除的是PCR反应体系中的离子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段.这只适合于几乎没有非特异性条带的PCR产物的收集.如果你的PCR产物具有非特异性条带,那么一定需要使

问题很多啊.或者是你的PCR仪需要进行荧光校准（如果其他探针也没有信号的话）,已经不能收集荧光信号了.或者是你的探针本身就有问题,合成的不好,信号很弱甚至没有信号.或者是你的探针存放时间太长,存放条件

一个可能原因,DNA结合了蛋白质,所以跑不出去.加loadingbuffer后加热（90度以上）一下再上样试试.另外一个原因,你的产物特别大（不一定是目标产物）再问：我做的是菌落PCR电泳检测结果，我

非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物

主带显著的情况下,很可能是引物聚合体.如果没有出现显著的你想要的主带,则是非特异扩增产物.第一种情况没事不用理会,第二种情况需要筛查模版中与引物的非特异性互补区,重新设计引物,或者升高退火温度试试.

首先要看你的条带是否清晰,虽然亮度不够但是清晰度应该高,没有拖尾没有非特异条带和引物二聚体,如果以上都没有,仅仅是目标条带不够亮的话,我觉得你可以将25微升体积同比放大至50微升反应体系,相应的制胶的

“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题（特异性很差）.如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer

一般是不要切胶,直接把第一次的PCR产物取一微升作为底物,再用第二队引物扩增一次,如果引物设计正确,就只会出现一条条带了.如果要计算大小,就按楼上说的.但是雀式pcr的目的就是至少做2次,以保证特异性

出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2

我之前跑PCR也是1···我个人觉得你应该先从引物考虑虽然PCR受很多因素的影响但是引物和退火温度无疑是很重要的两个方面没出现引物二聚体只能说你设计的两端的引物没有错配啊等等你可以找有经验的师兄师姐帮

非特异性扩增太多,建议稀释模板.提高退火温度,再试试.还有如果一次PCR产物也是如此,建议切胶回收与目的条带相近处的弥散带作为二次的模板.

与亮度直接相关的是DNA的量,一般以纳克表示.但是,一般点样时加入的DNA溶液是已知的,因此和浓度是等效的.

开始我以为是退火温度问题,但是你说做了两次,第一次没有条带,第二次有一条没有,这说明你加样有问题,还有你为什么要同一个cDNA要做六个PCR呢?还是lz说的不清楚?同样的条件同样的样品没理由会六条中只