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我用茚三酮法测蛋白的酶水解度,所用的酶为复合蛋白酶,条件参数为不同的酶/底物的比值,分别为1:1,1:2,1:3,1:4

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/11/08 14:38:26
我用茚三酮法测蛋白的酶水解度,所用的酶为复合蛋白酶,条件参数为不同的酶/底物的比值,分别为1:1,1:2,1:3,1:4,1:5,1:10,每个比例的水解反应试管中底物的总量都是一样的,浓度也一样,为1.25mg/ml,不同的只是酶的用量,可是最后在570nm下测出来的结果为:这6个管的吸光度基本一致,均在1.5左后.
这一现象的原因是什么呢?
是不是有这两种可能性:一种就是酶的活性太高,即使在酶/底物的比值为1:10的情况下,底物就已经被完全水解了,最后得到的游离氨基的量也就相同,故检测时表现的吸光度值也就一样;另一种就是,其实在酶解反应停止后,反应产物中的确存在不同浓度梯度的游离氨基,只不过由于氨基的浓度过高,已经无法在分光光度计上观测到颜色的变化.
1比1和1比10的结果不可能一样的我觉得是底物浓度太小了,所以1比1和1比10的结果没有太大区别,你看看提高底物用量或者减少溶液体积试试