全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/09/01 18:45:04

全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常
全基因组DNA双酶切（HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增也扩不出条带,或者条带太少.
我的酶产品是Promega买的,已经用了半年.
酶切体系是：
（1）DNA 1.5 ul(约500ng)
HpaⅡ(MBI) 0.8 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 19.8 ul
25 ul
于373-4h.
（2）DNA 1.5 ul(约500ng)
MspⅠ(MBI) 0.5 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 20.23 ul
25 ul
于37℃放置3-4h.
哪里出了问题,导致酶切电泳没有条带.

你的实验目的和详细步骤没说清楚.我先就现有的描述分析一下：
很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶出了问题.测试一下也很简单,找有酶切位点的质粒来试一下就知道了.看一下缓冲液是否用对了.条件是否正确.这一步的可能性最大.这些酶是你专用的还是公共试剂,公共试剂失活的可能性就更大了.
PCR做不出来,你的引物设计位点在哪里?是否是要连接后才能出结果,那除了酶切没有完成外,DNA连接酶出错也是有可能的.
再问：　　谢谢您的回答。有几点需要补充一下。　　是全基因组DNA ，不是质粒，条带正常的是弥散，没有单个片段。无法拿出来监测。　　　　酶的缓冲液是配套的，之前都可以切的正常。
　　　　实验目的是MSAP 甲基化检测，PCR 扩增后跑变性聚丙烯酰胺胶。
　　　　连接酶和酶切的酶就我一个人用，是不是半年酶失效了？
　　附上酶切图，左边第一条是纯DNA 对照

非常感谢！
再答：我说的是用质粒来测试酶的活力。找有这些酶切位点的质粒来试。酶的保存时间不是问题，关键是反复冻熔的次数不能过多

PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么提取细菌DNA检测到有条带,PCR后无条带;而基因组DNA检测到无条带的,PCR后却有条带.怎么解释? 我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊? 跑出的细菌总DNA 的条带是弥散的,marker跑的也不清楚, RAPD反应,DNA检测有条带,PCR没有条带,请问谁知道原因啊? CTAB法提取水果DNA时,可以看到清晰的RNA条带,但是DNA没有条带,为什么? 我用十一种微卫星引物扩增某一个体的基因组DNA,可是1.0%琼脂糖电泳检测时有的没条带,有的有很多条带?谢 PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带细菌基因组提取,电泳后为什么跑出来3条带? 转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. 纯化噬菌体后,提取其基因组DNA,跑琼脂糖凝胶,请问胶上显示几条带?是一条还是多条?