全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/09/01 18:45:04
全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常
全基因组DNA双酶切(HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增也扩不出条带,或者条带太少.
我的酶产品是Promega买的,已经用了半年.
酶切体系是:
(1)DNA 1.5 ul(约500ng)
HpaⅡ(MBI) 0.8 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 19.8 ul
25 ul
于373-4h.
(2)DNA 1.5 ul(约500ng)
MspⅠ(MBI) 0.5 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 20.23 ul
25 ul
于37℃放置3-4h.
哪里出了问题,导致酶切电泳没有条带.
全基因组DNA双酶切(HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增也扩不出条带,或者条带太少.
我的酶产品是Promega买的,已经用了半年.
酶切体系是:
(1)DNA 1.5 ul(约500ng)
HpaⅡ(MBI) 0.8 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 19.8 ul
25 ul
于373-4h.
(2)DNA 1.5 ul(约500ng)
MspⅠ(MBI) 0.5 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 20.23 ul
25 ul
于37℃放置3-4h.
哪里出了问题,导致酶切电泳没有条带.
你的实验目的和详细步骤没说清楚.我先就现有的描述分析一下:
很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶出了问题.测试一下也很简单,找有酶切位点的质粒来试一下就知道了.看一下缓冲液是否用对了.条件是否正确.这一步的可能性最大.这些酶是你专用的还是公共试剂,公共试剂失活的可能性就更大了.
PCR做不出来,你的引物设计位点在哪里?是否是要连接后才能出结果,那除了酶切没有完成外,DNA连接酶出错也是有可能的.
再问: 谢谢您的回答。有几点需要补充一下。 是全基因组DNA ,不是质粒,条带正常的是弥散,没有单个片段。 无法拿出来监测。 酶的缓冲液是配套的,之前都可以切的正常。
实验目的是MSAP 甲基化检测,PCR 扩增后跑变性聚丙烯酰胺胶。
连接酶和酶切的酶就我一个人用,是不是半年酶失效了?
附上酶切图,左边第一条是纯DNA 对照
非常感谢!
再答: 我说的是用质粒来测试酶的活力。找有这些酶切位点的质粒来试。酶的保存时间不是问题,关键是反复冻熔的次数不能过多
很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶出了问题.测试一下也很简单,找有酶切位点的质粒来试一下就知道了.看一下缓冲液是否用对了.条件是否正确.这一步的可能性最大.这些酶是你专用的还是公共试剂,公共试剂失活的可能性就更大了.
PCR做不出来,你的引物设计位点在哪里?是否是要连接后才能出结果,那除了酶切没有完成外,DNA连接酶出错也是有可能的.
再问: 谢谢您的回答。有几点需要补充一下。 是全基因组DNA ,不是质粒,条带正常的是弥散,没有单个片段。 无法拿出来监测。 酶的缓冲液是配套的,之前都可以切的正常。
实验目的是MSAP 甲基化检测,PCR 扩增后跑变性聚丙烯酰胺胶。
连接酶和酶切的酶就我一个人用,是不是半年酶失效了?
附上酶切图,左边第一条是纯DNA 对照
![](http://img.wesiedu.com/upload/8/50/850ba30a8a6272956cb32e127b127f10.jpg)
再答: 我说的是用质粒来测试酶的活力。找有这些酶切位点的质粒来试。酶的保存时间不是问题,关键是反复冻熔的次数不能过多
PCR结果没有条带,都是弥散的,这是为什么
提取细菌DNA检测到有条带,PCR后无条带;而基因组DNA检测到无条带的,PCR后却有条带.怎么解释?
我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?
跑出的细菌总DNA 的条带是弥散的,marker跑的也不清楚,
RAPD反应,DNA检测有条带,PCR没有条带,请问谁知道原因啊?
CTAB法提取水果DNA时,可以看到清晰的RNA条带,但是DNA没有条带,为什么?
我用十一种微卫星引物扩增某一个体的基因组DNA,可是1.0%琼脂糖电泳检测时有的没条带,有的有很多条带?谢
PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带
琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带
细菌基因组提取,电泳后为什么跑出来3条带?
转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.
纯化噬菌体后,提取其基因组DNA,跑琼脂糖凝胶,请问胶上显示几条带?是一条还是多条?