细胞转染我现在遇到了这个问题,我用的是化工学院合成的脂质体,按照不同的氮磷比转染A549细胞,开始做凝胶阻滞实验,看什么

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/07/09 01:53:31

细胞转染
我现在遇到了这个问题,我用的是化工学院合成的脂质体,按照不同的氮磷比转染A549细胞,开始做凝胶阻滞实验,看什么氮磷比能够包裹细胞,然后看这些氮磷比下的转染效率,我做的是24孔板,转2ug的EGFP,溶于100ul的无血清培养基中,另外脂质体根据氮磷比2、4、6、8、加2.3、4.6、6.9、9.2ul分别用无血清培养基补足100ul.然后讲两种液体混合,孵育后将200ul的转染液加入孔中,转染后4小时,细胞变形很厉害,换上完全培养基后1小时,细胞大部死亡.这是怎么回事?另外请问你们是怎么做转染的?

用的脂质体太多了,导致细胞膜大量破裂,所以细胞死亡,也有可能是每个孔的溶液体积太少了
我用lipofectamine 2000,DNA只用0.8微克,2微升的lipofectamine 2000
无血清培养基用的50微升加50微升,总共是100微升,然后每个孔其实还放了500微升的低血清培养基,所以总体积是600微升

质粒转染细胞第一次预实验转染效率较好,再做就转不进去了或者转染效率不到5%,是质粒反复冻融的问题吗? siRNA转染细胞的方法第一次做转染试验,请问怎样计算转染率,载体是带GFP的,就是弄不明白是用荧光的个数比上接种细胞总数吗质粒转染细胞不表达的问题~ 哪里细胞的质粒转染做得好? 请问HEK293细胞如何将质粒转染进去,有没有具体的步骤?我有lipo2000 用流式细胞仪分析细胞转染效率的原理是什么用质粒转染293T细胞,质粒纯度为260/280为1.9-1.95,请问可以脂质体转染吗? 如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法有人没有转染过NK细胞啊?应该用什么转染试剂啊?这是一种悬浮细胞. 哪一家公司细胞的质粒转染做得好? 转染的cas9质粒在细胞中能复制吗