作业帮质粒提取,机器测得OD260/OD280=2.04,浓度780ug/mL,但是电泳检测没有条带
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/07/18 19:27:43
质粒提取,机器测得OD260/OD280=2.04,浓度780ug/mL,但是电泳检测没有条带
第一次用一步法试剂盒提取质粒,提取之后,机器测得OD260/OD280=2.04,浓度780ug/mL,但是电泳检测没有条带.marker和对照的dna能检测出条带.
第一次用一步法试剂盒提取质粒,提取之后,机器测得OD260/OD280=2.04,浓度780ug/mL,但是电泳检测没有条带.marker和对照的dna能检测出条带.
估计有很多种可能,我简单说几种,你看看能不能对上号
一、电泳检测时的上样液浓度太大,导致的DNA无法进入胶体中.
1、通常是loading buffer中水分挥发掉了浓度太大,点样的时候会被枪头带出来,或者就是浓度大使得DNA无法进入琼脂糖凝胶,换loading buffer,或者加水.
2、样品中混有太多蛋白等杂质,阻碍DNA进入点样孔等.
二、RNA太多将染料全部结合掉了,导致DNA无法与EB或者核酸染料结合而无法被检测出,这个您可以将跑好的胶再染一遍色,就是泡在EB或者核酸染料稀释后的TEB中.
三、都降解了,你只说OD260/OD280=2.04,这个可能是DNA、RNA、dNTP、ddNTP,只要是含有那个环形的磷酸戊糖结构就能产生这样的吸收效果.
四、其他原因太多了,建议你先看看是不是上述原因吧,不行您再追问.
再问： 上样量是1uL,还有双酶切，单酶切的样，都没有条带，也看不到RNA与核算染料结合的情况，含有蛋白的概率不大，同样量的染料，刚提的质粒，不会全部降解
再答： 这张图片上看很明显你的成像仪设置有问题，先试着调节一下景深和焦距吧，左侧maker都几乎看不清了，带型也很糟糕，建议重新做一次电泳，这张片子即使是有条带也说明不了任何事，完全不清晰。 一般的这种情况下少于300ng的上样量估计都不会很明显，建议先重新配置电泳缓冲液，在TBE、TAE、TPE中首选TBE，电泳时的电压也不易超过2v/cm，制备的胶体请在4℃冰箱内凝固，时间不要超过20min，等解决了这些会是你电压检测的分辨率提高到25ng的上样量即可清晰检出。先解决了这些最基本的实验技术再查原因吧，否则真的很难分析了。 至于是不是含蛋白您证实了吗？其实很简单看看OD260/OD230的比值或者简单的做个酚氯仿抽提看看就好了，不知道您这个概率不大的根据，科研是严整的事。 完全降解这方面，您了放心，即使只是少量降解了，这张片子上看少于300ng的上样量肯定看不清了。查一下你的maker中最亮和最暗的条带的浓度，再乘以体积（通常2-5ul）计算一下就好了。
一、电泳检测时的上样液浓度太大,导致的DNA无法进入胶体中.
1、通常是loading buffer中水分挥发掉了浓度太大,点样的时候会被枪头带出来,或者就是浓度大使得DNA无法进入琼脂糖凝胶,换loading buffer,或者加水.
2、样品中混有太多蛋白等杂质,阻碍DNA进入点样孔等.
二、RNA太多将染料全部结合掉了,导致DNA无法与EB或者核酸染料结合而无法被检测出,这个您可以将跑好的胶再染一遍色,就是泡在EB或者核酸染料稀释后的TEB中.
三、都降解了,你只说OD260/OD280=2.04,这个可能是DNA、RNA、dNTP、ddNTP,只要是含有那个环形的磷酸戊糖结构就能产生这样的吸收效果.
四、其他原因太多了,建议你先看看是不是上述原因吧,不行您再追问.
再问： 上样量是1uL,还有双酶切，单酶切的样，都没有条带，也看不到RNA与核算染料结合的情况，含有蛋白的概率不大，同样量的染料，刚提的质粒，不会全部降解
再答： 这张图片上看很明显你的成像仪设置有问题，先试着调节一下景深和焦距吧，左侧maker都几乎看不清了，带型也很糟糕，建议重新做一次电泳，这张片子即使是有条带也说明不了任何事，完全不清晰。 一般的这种情况下少于300ng的上样量估计都不会很明显，建议先重新配置电泳缓冲液，在TBE、TAE、TPE中首选TBE，电泳时的电压也不易超过2v/cm，制备的胶体请在4℃冰箱内凝固，时间不要超过20min，等解决了这些会是你电压检测的分辨率提高到25ng的上样量即可清晰检出。先解决了这些最基本的实验技术再查原因吧，否则真的很难分析了。 至于是不是含蛋白您证实了吗？其实很简单看看OD260/OD230的比值或者简单的做个酚氯仿抽提看看就好了，不知道您这个概率不大的根据，科研是严整的事。 完全降解这方面，您了放心，即使只是少量降解了，这张片子上看少于300ng的上样量肯定看不清了。查一下你的maker中最亮和最暗的条带的浓度，再乘以体积（通常2-5ul）计算一下就好了。
提取RNA后,用分光光度计测RNA纯度,OD260/OD280,OD260/OD230的范围分别是多少
DNA电泳没有图像昨天使用CTAB法提取植物的DNA,提取过程中能看到沉淀,但是稀释溶解后,电泳看不到任何条带,而且电泳
什么是OD230,OD260,OD280?
trizol提取烟草组织100mg叶片总RNA,最终浓度大概多少?30ul溶解RNA.每次提的OD260/OD280较低
PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常.
提出来的RNA 电泳检测时没有条带 用的是1%琼脂糖电泳
提取RNA的OD260/OD280的值在什么范围内较好
RNA提取后OD值及浓度都好为什么电泳未见条带啊
为什么提取质粒测出来OD值了,跑胶没有条带?
天根细菌基因组DNA提取试剂盒来提取革兰氏阳性菌DNA,提出来后测OD260/OD280小于1.6,为什么?
转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带.
为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了