重组质粒酶切鉴定没有条带但跑pcr有条带

你需要的是理解:DNA是双链的吧.比如说左边一条是1的,右边的是2的.121212121212那么上下隔开1与1间就要用DNA聚合酶``连接单个链上的DNA片段左右1和2的就需要DNA连接酶```连接

如果PCR系统没有问题,很可能是质粒和染色体发生了重组.建议提细菌的genomeDNA做一次PCR.如果是阳性,就说明是这样.另外,还可以另挑几个菌落,重新提质粒扩增.

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

能确定菌液pcr出来的就是目的条带吗?如果确定,那就是可能质粒抽提和酶切这两步出了问题

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢再答：所以

只要制备胶等过程都没问题,marker也跑出条带了,那这种情况最有可能的原因还是质粒的浓度过低.所以,虽然OD值可测出来,但胶显示不出来,我就遇到过这样的情况,还算很普通的现象.下次再加大菌量就行.再

别人给的质粒,第一要做的是转化保种啊,别人给那点哪够分析.转化完了自己抽质粒分析.质粒直接跑电泳理论上是三条带,要想分析建议做单酶切再电泳.再问：又做了一次，拿个质粒菌做阳性对照也都没有提出来。不知道

因为是单酶切,所以可能有两种插入方向所以就是1+0.1=1.13+2.6=5.61+2.6=3.63+0.1=3.1这样子的其实一般来说只有一个方向的插入是正确的因此需要挑单克隆的菌株,然後用这种方式

分子水平上,用人工的方法提取（或者合成）不同的生物的遗传物质,在体外切割拼接和重新组合,然后通过不同方法把重组的DNA分子引入受体细胞,使外源DNA在受体细胞进行复制与表达,按人的需要生产不同的产物或

可以.载体是可以插入核酸片段、能携带外源核酸进入宿主细胞,并在其中进行独立和稳定的自我复制的核酸分子.基因工程中广泛应用的载体多来自人工改造的细菌质粒、噬菌体或病毒核酸等.多数载体是DNA分子,质粒就

如果是重组质粒的话,应该两种,正义基因表达载体和反义基因表达载体.再问：���������廹���������������ͷ��������������

重组质粒作为一个单独的质粒进入大肠杆菌发挥作用,不需要与ecoli体内原有的质粒结合……

重组质粒导入受体细胞应该仅限于导入过程,而后事如何就不管了.

如果是双酶切,而且两个酶切位点不能形成自连,那么插入目的基因也只能获得一种重组质粒.如果是单酶切,或者双酶切的两个酶切位点是同尾酶,那么插入目的基因能获得两种重组质粒.

可以继续.只需补充加入内切酶便可.因为你的buffer没有消耗,而BSA本身只是为了保护酶活性的杂蛋白,没有特别功能,量的多少本来关系也不很大.同行,好运!

酶切位点消失啦,测个序看看.再问：测序了，说我的链接质粒没有信号再答：重新做吧，多半不对！

原因有很多,1,PCR出了问题,2,跑胶的缓冲液出了问题3,MARK溶液中的DNA被降解了4,操作时间太长,DNA被降解

首先明确一个问题,你的这个酶切位点在这个质粒中是唯一的吗,也就是说你只想把这个质粒切开吗?看你的结果好象这种可能性大些,那样我觉得最有可能是梅切不完全,即切开的线形质粒会比未切开的质粒跑得慢但两条带很

首先,你要确定你所切下来的目标条带的分子量大小.如果切下来的片段分子量小的话（小于1kb),经常会出现看不到的情况.因为从质粒上面切下来的片段摩尔数是和质粒一致的,在分子量很小的情况下,等摩尔数的小片

什么基因?什么质粒?正常情况不用这样做的一般做表达用的基因片段是需要测序鉴定的连T载体就是为了去测序,证实你扩增片段没有突变且是你需要的目的片段然后再去连接你的目的载体就ok了