双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/07/17 17:26:23

双酶切的问题
我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作,

首先,你要确定你所切下来的目标条带的分子量大小.如果切下来的片段分子量小的话（小于1kb),经常会出现看不到的情况.因为从质粒上面切下来的片段摩尔数是和质粒一致的,在分子量很小的情况下,等摩尔数的小片段比质粒片段的质量要小很多,而一般的DNA染料（EB等）的荧光强度都是和质量呈线性关系的,所以很有可能因为片段质量太小而观察不到.如从11kb的载体上双酶切1kb的片段,那么载体片段和切下的片段质量比就是10比1,那么荧光强度也是10比1,如果你的原始酶切的质粒质量就不是很多,那么切下的片段就会根本看不到.解决这个问题的方法就是加大原始酶切反应体系中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量.接着,还有一种可能就是两种酶的酶切效率相差甚远,一种酶活性非常好,一种酶则活性很弱,这样就会产生看不到酶切片段的情况.而造成这种情况,一般都是通用buffer没有选好,所以你要看两种内切酶的说明书,选择一种两种酶都具有很好活性的buffer进行酶切.实在没有很好的通用buffer,那么你需要延长酶切时间.
用单酶切不是不可以,但质粒自连的可能性会很大,这种情况下,你可以用碱性磷酸酶处理后再进行连接,但自连可能性还是有的.
醇沉法就是加入两倍体积的乙醇,然后在－20或者-70中放置15-30min,接着进行短暂低速离心（1-2Min,5000 rpm左右）,弃上清,然后干燥.干燥后加入适当的水或者TE溶解就OK了.醇沉法回收DNA片段效率会很低,所以你要预先多准备一些DNA.

双酶切的问题我们做是质粒用的双酶切,但是只有一条条带,有没有解决方法么,用单酶切可以么,还有乙醇沉淀法的操作, 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀植物DNA的提用乙醇洗沉淀的时候还有白色的沉淀,但是电泳时只有RNA,没有DNA 转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. WB杂带的问题,出现两条带,还有就是只有一条带,但与对照组不在一条线上?出现两条带是非常正常的现象 CTAB法提取水果DNA时,可以看到清晰的RNA条带,但是DNA没有条带,为什么? 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因. PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带生化实验做了质粒DNA的双酶切,实验用的是BamH1 和EcoR1 .实验老师课上还讲了结果.但是不让拷ppt.我们做出 DNA电泳没有图像昨天使用CTAB法提取植物的DNA,提取过程中能看到沉淀,但是稀释溶解后,电泳看不到任何条带,而且电泳只有细菌里有质粒吗?质粒是DNA还是RNA?原核生物的遗传物质都是质粒吗? pcr结果出不来,每次都是只有100bp以下的条带,没有其他的条带