用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：数学作业时间：2024/07/16 14:42:15

用这两个酶没问题,你要确定几件事：
1 目的基因和载体都切开了吗?特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低；载体上两个酶切位点连在一起吗?
2 感受态的效率问题
3 转化过程对不对,如抗生素加的对不对
再问：我的目的基因是转化后，摇菌提质粒后酶切。酶切后有有两条带，回收下面的一条。但是上面一条老感觉像两条离得很近的带，不知道为什么。这两个酶在载体上中间隔了一个酶呢。感受态、转化都没有问题。
再答：一个斑都不长？载体很大，还是你的目的带很长？用摩尔比载体：片段=1：10试试吧

用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢? 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急基因工程中!把目的基因和载体结合后植入受体细胞然后呢!目的基因会怎么样?被值的生物为什么有新的性状? 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 双酶切为什么能保证目的基因和载体定向连接呢您好,我想问问在细胞转化时,pUC19载体为何选用DH5a菌株,为什么不选择TOP10或JM109呢?是因为价钱关系吗构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和为什么必须使用同一种限制酶对载体和目的基因进行切割? 标记基因和目的基因是连在一起的吗?如何用标记基因筛选目的基因载体? PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑. 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增