PCR片段直接测序和PCR片段经克隆后测序的结果有何区别?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/07/18 02:00:25

众所周知,PCR圹增过程中会出现很多错配现象,但不可能所有的错配都发生在同一位置.PCR片段直接测序时,其结果是PCR片段众多分子的混合物的结果.如果在某一个点上出现了几十次错配现象,但大多数分子（或许是几十万个分子）在这个点上应该还是正确的,在测序时,错配现象也就是反映不出来了.因此,PCR片段直接测序的结果反映的是PCR用模板最原始的结果.而PCR片段经克隆后测序是测定了某一个分子的DNA序列.在几十个循环的PCR扩增过程中,很难保证某一个分子的任何点都不发生错配.因此,PCR片段经克隆后的测序结果,往往存在着一些错配的序列,和PCR片段直接测序的结果相比有些碱基会有所不同.这种错配现象的多少取决于PCR扩增时使用的DNA聚合酶的保真性能.要减少PCR扩增过程中的错配现象,在PCR反应时,请选用保真性能高的DNA聚合酶.--------转自三博远志网站(测序FAQ)

PCR片段直接测序和PCR片段经克隆后测序的结果有何区别? RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么? 能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增我做TA克隆,准备拿序列去测序.做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧?因为我的胶回收目的片段比普通PCR和基因克隆PCR的引物设计有什么不同和注意事项? 关于克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCR 双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶 pcr管与离心管离心管就是PCR管吗?PCR板又是怎么使用的?其中无裙边,半裙边和全裙边是什么区别?各有何应用? 绝对定量PCR/荧光定量pcr 用途/半定量pcr/pcr荧光测定/pcr片段纯化对基因片段进行测序的目的,以及直接测序和克隆测序的区别和适用条件!基础有点薄弱,谢谢赐教! PCR产物直接测序的原理