为什么将构建好的载体,电转入嗜热链球菌后,平板上长出了单克隆,可是却提不出质粒?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/08/29 15:37:39

设计一对检测引物,先进行菌落pcr检测,找出阳性克隆,在扩大培养提质粒.
保险起见,你最好确认下质粒的抗性以及你自己的操作.
再问：乳酸菌不适宜做菌落PCR吧很难平破壁啊今天我用自己配的试剂，用最原始的方法提也不行
再答：挑取乳酸菌单菌落，然后沸水或者金属浴100℃ 2min，或者用玻璃珠破壁。再pcr。
再问：谢谢您耐心的解答，为什么就是提不出来质粒呢？我试了好多方法，是不是拷贝数太低在提取的过程中就丢失了。换了好几个试剂盒，然后又自己配的溶液按照最原始的方法提也不行。犯愁啊
再答：你百度下这篇文章《乳酸乳球菌质粒提取方法的改进与优化》一般所用的试剂盒基本都是用碱法提，适用于革兰氏阴性菌，乳酸菌细胞壁较厚，很难破壁。
再问：恩我看那篇文章了的，就是多了部用溶菌酶处理，我试了也还是不行，是我的质粒太特别了，今天我还特意试了一个其他的乳酸乳球菌也提出来了。
再答：即使拷贝数再低，也是能提出来的。既然其他的乳酸菌能提出来，说明方法没问题。还是最前面的那个，你先挑取多个单菌落，做菌液pcr，确认有了以后，再摇菌提质粒。这时候再提不出来，你再确认下质粒的抗性，抗生素浓度，或者是摇菌时间，是否被杂菌污染等等。

转入质粒的大肠杆菌（+pGLO）在LB/amp平板和LB/amp/ara平板上生长有什么不同?为什么? 可以用构建好的插入了目的基因的表达载体重组质粒做southern吗目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 重组质粒构建一个DNA为什么要接入两个不同的载体? 我已经有含有目的基因的T质粒了,怎样构建表达载体啊? 基因工程构建基因表达载体用到质粒的原因用倒平板法和涂布计数法,其平板上长出的菌落有何不同?为什么要培养较长时间(48h)后观察结果? 我的目的片段连T载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR能P出目的片段,再提质粒用Ecor1做酶切,片段变小怎么回单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么? 用紫外线照射红色细菌的培养液，将其接种在平板培养基上，几天后出现了一个白色菌落，把这个白色菌落转移培养，长出的菌落全是白